Propriétés des acides nucléiques
Non impliqué dans la stabilisation
• Les liaisons hydrogène établies entre CG et AT
• Et celles entre les P et le solvant
Impliqué dans la stabilisation
Empilement des bases complémentaires → intérieur de l'hélice hydrophobe
Localisation du squelette peutose/ phosphate hydrophile à l'extérieur de l'hélice
Effets des acides
• Forts : Hydrolyse complète des acides nucléiques
• Dilués : Création de sites apuriniques, libération de la base azotée purine
Effet des alcalis
Changement état tautomérique
A pH = 7 → C=O
Augmentation pH → C-OH →uracile
Jusqu'à pH = 9 C-O-
Propriétés chimiques ADN
Dénaturation = Séparation des 2 brins d'ADN
Déprotonation (pH = 9) → perte nombre de liaisons hydrogènes inter-moléculaires entre bases azotées complémentaires
Propriétés chimiques ARN
Dénaturation= Séparation des séquences complémentaires (structures hélicoïdales = Tige)
Déprotonation (pH = 9) →perte du nombre de Iiaisons hydrogènes intra-moléculaires entre bases
Coupure, rupture statistique des ARN
Effets d'agents dénaturants
Urée, Formamide
Rupture liaisons inter-moléculaires → pénétration eau → moins stable
Conclusion effets
ADN stable → mise à profit pour analyse "ADN ancien" = récupération et séquençage de l'ADN
Etapes extraction et purification ADN
Réduction à froid de tissus
Lyse
Extraction ADN
Contrifugation
Précipitation de l'ADN
Lyse
Par SDS (détergent) → désorganise les membranes (détruit membrane cellulaire)
Par protéinase K → hydrolase
Extraction ADN
Formation d'une émulsion
Extraction des lipides membranaires
Centrifugeation
En 3 phases
• Phase aqueuse (sup) avec ADN soluble dans l'eau
• Interphase (face) contenant les débrits protéiques
• Phase organique (inf) contenant les lipides membranaines
Précipitation ADN
Forte concentration en sel