Biochimica clinica
Da dove provengono gli enzimi che troviamo nel circolo?
Da cellule secernenti attivamente oppure sono enzimi intracellular presenti nel sangue come conseguenza del normale ricambio cellulare
Dimmi 3 caratteristiche degli enzimi nella diagnostica clinica
Sono facilmente dosabili in campioni organici
Stabili durante la conservazione e l'analisi
Significativi dal punto di vista diagnostico
Cosa valutiamo nel monitoraggio enzimatico?
Velocità di formazione del prodotto
Scomparsa del substrato
Modificazione di un coenzima come ad esempio la riduzione del NAD
Cos'è un saggio cinetico?
Un metodo per cui una reazione viene seguita nella sua interezza mediante misurazioni successive ad intervalli di tempo prestabiliti fintanto che la formazione del prodotto aumenta linearmente nel tempo
Quali sono i fattori che influenzano la velocità di reazione?
Concentrazione di enzima e substrato
Temperatura e ph
Presenza dei cofattori
Presenza di modulatori positivi e negativi
Quand'è che una reazione raggiunge la massima velocità di reazione?
Quando il substrato satura i siti enzimatici
Cos'è la costante di michaelis-menten?
La concentrazione di substrato che produce una velocità che è la metà della velocità massima
Cos è l'amiloidosi?
È un accumulo di sostanza amiloide nell'interstizio
Quali sono i due tipi di amiloidosi?
A. Sistemica reattiva e A. Idiopatica
Fattori eziopatogenetici dell'amiloidosi reattiva sistemica?
A seguito di processi infiammatori cronici si può avere il deposito della proteina di fase acuta, la siero amiloide alfa, essa accumulandosi si polimerizza e deposita in organi come fegato, milza, reni e linfonodi.
Fattori eziopatogenetici amiloidosi idiopatica
Cause ereditarie soprattutto in gatti e cani di razze orientali (siamese, bengala, shar-pei)
Aspetto macroscopico dell'amiloidosi epatica
Fegato aumentato di dimensioni, colore giallo arancio o normale, pesante, di consistenza soda o pastosa, facile alla lacerazione.
In concomitanza all'amiloidosi cosa accade agli epatociti?
Vanno in atrofia
Quali sono i marcatori di funzionalità epatica?
Alt alanino aminotransferasi
Ast aspartato aminotransferasi
Alp fosfatasi alcalina
Ggt gamma glutamiltransferasi
Bilirubina
Quali parametri valutiamo in un profilo biochimico ristretto?
Marcatori epatici, marcatori renali, alcuni elettroliti e la glicemia
Cos è la variabilità preanalitica?
Tutti i fattori e i processi che influenzano il campione prima che venga analizzato.
Relativa sia al paziente che al campionamento: raccolta, campione incongruo
Siti di prelievo nei vari animali
Cavallo: v. giugulare
Bovino: v. Giugulare e coccigea
Ruminanti: v. Giugulare
Cane: v. cefalica, giugulare e safena
Gatto: v. giugulare, cefalica e femorale
Coniglio: v. Auricolare
Tartaruga: v. Caudale, giugulare, seno cervicale dorsale
Ratto/topo: plesso orbitale
Cos è il siero?
È la parte liquida del sangue che si ottiene post coagulazione e centrifuga
Cos'è il plasma?
È la parte liquida del sangue contenente anche le proteine della coagulazione. Si ottiene dal sangue contenente anticoagulante e centrifugato
Di quanto differisce la carica proteica tra siero e plasma?
Siero 0.5 g/dl < plasma
Che provette usiamo se ci serve plasma o sangue intero?
Provette con anticoagulanti
EDTA
Eparina
Sodio citrato
Che campione usiamo per la biochimica Clinica?
Plasma e siero
Che campione usiamo per l'emocromo?
Sangue intero
Che campione usiamo per la coagulazione?
Plasma
Qual'é il meccanismo d'azione dell'edta? E per quali esami è indicato?
Chela irreversibilmente il calcio impedendo la cascata coagulativa
È indicato per l'esame emocromocitometrico, per la conta piastrinica e la morfologia cellulare.
Quali sono le controindicazioni per l'edta?
Causa emolisi in cellule nucleate, è inadatto per pesci, uccelli e rettili.
Chela altri elettroliti impedendone la misurazione, impedisce l'attività della Alp chelando lo zinco, e dell'amilasi
Non permette il test della coagulazione
Qual'è il meccanismo di azione dell'eparina? E per cosa è indicata?
È un glicosamminoglicano anticoagulante naturale prodotto dai basofili. Attiva l'antitrombina 3 e inibisce i fattori della coagulazione
Consente la separazione del plasma per la biochimica Clinica, lesame emocromocitometrico anche per uccelli e rettili. Nel cane e nel gatto da una conta piastrinica alterata, ma è utile in emergenza per la possibilità di fare emocromo e biochimico su di un unico campione
Controindicazioni eparina
Misura di Na e K
Conta piastrinica (non ne inibisce l'aggregazione)
Test coagulazione
Meccanismo di azione del sodio citrato e indicazioni
Il sodio citrato chela reversibilmente il calcio, ovvero aggiungendo calcio in eccesso permette di attivare la coagulazione. Indicato per il test di coagulazione. Bisogna rispettare il rapporto 1:9 col sangue
Che provette usiamo per ottenere il siero?
Provette vuote o con gel separatore o dischetti di carta che separano siero e coagulo. Non c'è nulla di chimicamente attivo
A cosa serve l'edtanaf?
Contiene sodio fluoruro che inibisce la glicolisi, serve per valutare la concentrazione di glucosio
Cosa succede al glucosio dopo il prelievo?
Viene consumato dai globuli rossi
Che provette usiamo per l'analisi dei metalli traccia?
Provette metal free
Cosa facciamo subito dopo il prelievo?
Misceliamo la provetta, eccetto che per il siero in quel caso si lascia coagulare per 15/30 minuti (60 se l'animale è sotto terapia anticoagulante)
Che impostazioni usiamo per la centrifugazione?
1500g per 10/15 minuti
Per il plasma saliamo a 3000g
Che temperatura dobbiamo mantenere per i vari campioni?
T. Frigo per sangue intero, plasma e siero.
Congelamento per spedizione
(congelamento solitamente rovina gli enzimi)
In che ordine mettiamo le provette?
1 emocoltura
2 coagulazione
3 siero senza additivi o con gel
4 eparina
5 edta
6 inibitore glicolisi edtanaf
7 altri tipi
Cosa succede se centrifughiamo troppo presto il siero?
Si formano coaguli di fibrina
Temperatura interna della centrifuga
20-22°C
Quali sono gli interferenti del campione?
Emolisi
Ittero
Lipemia
Cos'è un interferente?
Una sostanza presente nel siero o plasma che porta ad Alterazione l'analisi
Quali sono le sostanze che causano interferenza?
Emoglobina, trigliceridi, chilomicroni, bilirubina
Qual'é la concentrazione di emoglobina visibile ad occhio nudo?
30mg/dl
Quali sono i 3 motivi per cui l'emolisi crea disturbo?
1 variazione colorimetrica ne risentono creatinina e alp
2 banda extra nell'elettroforesi
3 dispersione di elettroliti e Alterazione di enzimi con Alp e amilasi
Cause di emolisi
Laccio emostatico troppo stretto
Aspirazione troppo vigorosa
Passaggio del sangue attraverso l'ago
Miscelazione vigorosa
Ritardata separazione plasma
Centrifugazione errata
Trasporto o stoccaggio non idoneo
Qual'é la concentrazione di bilirubina visibile ad occhio nudo?
> 2mg/dl
Differenza ittero sierico nelle varie specie
Erbivori hanno un siero giallastro che vira a marrone in caso di ittero.
I carnivori hanno un siero trasparente
I conigli hanno un siero giallognolo dovuto alla dieta ricca di beta carotene
L'ittero disturba per 2 motivi
Interferenza spettrofotometrica
Alterazione chimica
Cos'è l'interferenza lipemia?
Aspetto torbido del campione percepibile ad occhio nudo. Plasma lattescente o opaco a causa dell'aumento di trigliceridi/chilomicroni /colesterolo
È fisiologica dopo i pasti
Test di refrigerazione per la lipemia
Siero refrigerato per 12 ore
Se si forma uno strato più denso sopra l'animale aveva mangiato o abbiamo una iperchilomicronemia primaria.
Se resta torbido abbiamo un eccesso di lipidi patologico
Che tipo di interferenza da la lipemia?
Spettrofotometrica
Assorbanza
Fisico, fa da solvente
Cosa succede alla creatinina con i diversi interferenti?
Lipemia: aumenta
Emolisi e ittero: sottostima
Cosa succede all'alp con i diversi interferenti?
L'attività di Alp si valuta con tecnica colorimetrica, porta a produrre una sostanza giallo intenso
Lipemia: sovrastima
Ittero: sovrastima
Emolisi : sottostimato (parametro variabile in base al contenuto di zinco liberato con l'emolisi)
Qual è il metodo ufficiale per la creatinina?
Il metodo di jaffé
Cos'è il metodo di jaffé? E che differenza c'è col saggio per la creatinina?
Una reazione colorimetrica tra la creatinina e una soluzione alcalina di picrato che porta ad una colorazione gialla intensa. Nella metodica modificata il reattivo diventa di un colore arancio intenso
Cosa rappresentano alt e Ast?
Indice di integrità degli epatociti
Cosa rappresentano Alp e Ggt?
Valutano la capacità di espellere la bile dai dotti biliari intra epatici fino alla colecisti
Cosa rappresenta la bilirubina?
O indice di distruzione eritrocitaria o Alterazione nei meccanismi di trasporto
Come si comportano alt Alp e Ast in fase cronica?
Alt e alp calano Ast aumenta
Con che rapidità in un campione di siero cala il glucosio ematico?
Ogni ora circa il 5-10% viene consumato dagli eritrociti
Quali sono le avvertenze per il prelievo di in campione per la misura della glicemia?
Animale a digiuno da 12h
Evitare lo stress (leucogramma e glicemia da stress nel gatto)
Separazione del siero dopo 30minuti
Utilizzo sostanze che inibiscono la glicolisi: fluoruro di potassio
Vi sono differenze tra le sostanze che inibiscono la glicolisi?
Si, alcune bloccano la glicolisi agli stadi iniziali come il tampone citrato, altri come il fluoruro di sodio bloccano la reazione nelle sue fasi distali